相對定量 (mRNA表達(dá)量分析)：基因表達(dá)的研究一般采用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和內(nèi)參基因同時(shí)分別進(jìn)行定量，然后求出對于內(nèi)參基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進(jìn)行比較，可以對不同樣品間的mRNA進(jìn)行表達(dá)量分析。內(nèi)參基因通常選用表達(dá)量相對恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過同時(shí)對內(nèi)參基因的實(shí)時(shí)檢測，可以對樣品之間由于起始細(xì)胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進(jìn)行校正，達(dá)到在嚴(yán)格意義上對樣品之間的mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析之目的。
SYBR Green I 是一種與雙鏈DNA小溝結(jié)合的熒光染料，SYBR Green I只與雙鏈DNA結(jié)合才能發(fā)出熒光，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，熒光信號與雙鏈DNA分子數(shù)成正比，隨著擴(kuò)增產(chǎn)物增加而增加，熒光信號的強(qiáng)度代表了反應(yīng)體系中雙鏈DNA分子的數(shù)量。
服務(wù)價(jià)格
|
服務(wù)編號
|
服務(wù)內(nèi)容
|
價(jià)格
|
周期
|
|
CWS019
|
每基因≤10樣品
|
￥2980/整個(gè)服務(wù)
|
3-4周
|
|
CWS020
|
每基因10-20樣品
|
￥278/樣品?基因
|
4-5周
|
|
CWS021
|
每基因>20樣品
|
￥258/樣品?基因
|
4-5周
|
服務(wù)內(nèi)容
以熒光定量PCR方法對樣本基因表達(dá)進(jìn)行相對定量。
實(shí)驗(yàn)流程
1.RNA/DNA提取。
2.將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
3.隨機(jī)選擇一個(gè)樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，篩選引物，優(yōu)化程序。
4.熒光定量PCR正式試驗(yàn)。
5.提交報(bào)告，原始Ct值。
服務(wù)優(yōu)勢
·先進(jìn)的儀器，優(yōu)質(zhì)的試劑，專業(yè)的團(tuán)隊(duì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更可靠。
·免費(fèi)設(shè)計(jì)優(yōu)化引物，使定量PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率達(dá)到90%以上，使相對定量結(jié)果更可靠。
樣品要求
客戶需提供組織、細(xì)胞、血液等樣品材料，或純化好的總RNA或總DNA，反轉(zhuǎn)錄好的cDNA樣品，具體要求如下：
|
材料種類
|
樣品要求
|
起始量
|
|
血液
|
新鮮血液及抗凝劑處理的全血
|
1ml
|
|
培養(yǎng)細(xì)胞
|
離心收集的細(xì)胞
|
1x107
|
|
動物組織
|
一般材料
|
100mg
|
|
植物
|
一般材料
|
100mg
|
|
RNA
|
OD260/OD280在1.9-2.1之間，完整性好
|
>1ug
|
|
DNA
|
OD260/OD280在1.7-1.9之間，完整性好
|
>1ug
|
|
cDNA
|
內(nèi)參基因檢測成功
|
>20ul
|
終產(chǎn)品
·目的基因剩余引物 (上游引物和下游引物，合成量≥2OD)；
·目的基因引物序列；
·相對定量實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
服務(wù)說明
·客戶提供基因序列。
·以上報(bào)價(jià)是針對Human、Mouse、Rat三個(gè)生物物種采用染料嵌合熒光法的報(bào)價(jià)。如果是此三種生物物種以外的物種，具體價(jià)格請垂詢。
·以上報(bào)價(jià)是以提取的核酸（DNA或cDNA）為起始材料設(shè)定的，如果需要進(jìn)行核酸純化，費(fèi)用另計(jì)。
·如因?qū)嶒?yàn)材料等非本公司原因造成某實(shí)驗(yàn)步驟失敗，使實(shí)驗(yàn)提前終止，已啟動的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目仍正常收費(fèi)。
·公司還提供絕對定量服務(wù)，客戶需提供標(biāo)準(zhǔn)品，若需制備標(biāo)準(zhǔn)品，費(fèi)用另計(jì)。
